Авторы
Маркевич П.С.1, Филиппов А.В.1, Долгих Р.Н.1, Боровкова Н.В.2, 3, 4, Макаров М.С.2, Сторожева М.В.2, Пономарев И.Н.2, Зеленина Т.А.5, Земляной А.Б.1
1 ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр хирургии им. А.В. Вишневского», Москва
2 ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В. Склифосовского», Москва
3 ФГАОУ РНИМУ им. Н.И. Пирогова, Москва
4 ФГБОУ «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования», Москва
5 ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова», Санкт-Петербург
Аннотация
Контролируемая генерация активных форм кислорода и азота стимулирует процессы заживления ран. Одним из источников управляемой генерации активных форм кислорода и азота является низкотемпературная аргоновая плазма (НТАП), которая активизирует различные формы клеточной активности. Однако, тонкие механизмы такой стимуляции остаются невыясненными. Таким образом, возникает необходимость подробного изучения биологического эффекта НТАП на клетки человека.
Цель работы: оценить влияние НТАП на структуру и пролиферативную активность фибробластов человека in vitro.
Материалы и методы. Использовали культуру фибробластов человека (линия М-21, 25 пассаж, Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова). После воздействия НТАП клетки культивировали в течение 3 суток в питательной среде ДМЕМ/F12 c добавлением 10% сыворотки эмбрионов коров «Gibco», далее проводили морфофункциональный анализ клеток с использованием витального окрашивания. Через 3 суток проводили пассирование клеток (пересев в другие чашки Петри с разведением 1:2), затем клетки культивировали в течение 3 суток, и проводили повторный морфофункциональный анализ. Все работы с культурами клеток проводили в соответствии с международным стандартом GMP.
Результаты. Стимуляция пролиферативной активности фибробластов отмечена на втором пассаже после обработки НТАП с расстояния 10 см 30 и 45 с и 15 см – 45 с.
Использование экрана в виде коллагеновой повязки заметно увеличивает выживаемость клеток при воздействии плазмы с расстояния 10 см в течение 15 с. На фоне экранирования снижение целостности клеточных мембран после воздействия плазмы менее выражено, чем при воздействии без экранирования. При повторном посеве клетки, обработанные в присутствии коллагенового экрана, проявляют высокую пролиферативную активность и восстанавливают целостность мембран.
Ключевые слова: низкотемпературная аргоновая плазма, фибробласты, пролиферация.
Список литературы
1. Макаров М.С., Конюшко О.И., Сторожева М.В., Боровкова Н.В., Хватов В.Б., Пономарев И.Н. Патент РФ № 2484474 от 10.06.2013.
2. Sen CK, Roy S. Redox signals in wound healing Biochim. Biophys. Acta. 2008; 1780: 1348-1361. doi: 10.1016/j.bbagen.2008.01.006.
3. Sen CK. Wound healing essentials: let there be oxygen, Wound Repair Regen. 2009; 17: 1-18. doi: 10.1111/j.1524-475X.2008.00436.x.
4. Yang B, Chen Y, Shi J. Reactive Oxygen Species (ROS)-Based Nanomedicine. Chem Rev. 2019; 119(8): 4881-4985.
5. Reuter S, Stephan & von Woedtke, Thomas & Weltmann, Klaus-Dieter. The kINPen – A review on physics and chemistry of the atmospheric pressure plasma jet and its applications. Journal of Physics D Applied Physics. 2018; 51. doi: 10.1088/1361-6463/aab3ad.
6. Xiong Z, Zhao S, Yan X. Nerve stem cell differentiation by a one-step cold atmospheric plasma treatment in vitro. J Vis Exp. 2019; Jan 11: 143.
7. Hajam YA, Rani R, Ganie SY, Sheikh TA, Javaid D, Qadri SS, Pramodh S, Alsulimani A, Alkhanani MF, Harakeh S, Hussain A, Haque S, Reshi MS Oxidative Stress in Human Pathology and Aging: Molecular Mechanisms and Perspectives. Cells. 2022; 11(3): 552. doi: 10.3390/cells11030552.
8. Crochemore C, Cimmaruta C, Fernández-Molina C, Ricchetti M. Reactive Species in Progeroid Syndromes and Aging-Related Processes. Antioxid Redox Signal. 2022; 37(1-3): 208-228. doi: 10.1089/ars.2020.8242.
